ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）是一種高靈敏度的免疫學(xué)檢測方法，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷。盡管其特異性強，但在實際操作中仍可能出現(xiàn)假陰性結(jié)果，即樣本中實際存在目標(biāo)物質(zhì)卻未被檢出。這不僅影響實驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，還可能導(dǎo)致錯誤的科學(xué)或臨床判斷。綜合分析，假陰性問題主要源于以下三個方面。

影響因素分類解析

一、樣本因素

?窗口期影響?：感染后2-3周內(nèi)抗體濃度不足，可能導(dǎo)致假陰性。

?樣本處理不當(dāng)?：

反復(fù)凍融破壞抗體結(jié)構(gòu)；

溶血、高血脂或細(xì)菌污染干擾檢測；

使用肝素/EDTA等抗凝劑抑制酶活性。

二、試劑相關(guān)因素

試劑的質(zhì)量和適用性是保證檢測準(zhǔn)確性的前提。

1、試劑質(zhì)量問題：使用無批準(zhǔn)文號、過期或保存不當(dāng)（如未4℃冷藏）的試劑，可能導(dǎo)致靈敏度下降。

2、試劑交叉反應(yīng)：某些突變體（如HBV的S基因突變）可能改變抗原表位，導(dǎo)致商用試劑盒中的抗體無法有效識別，造成漏檢。

3、藥物干擾：患者體內(nèi)高效價的乙肝免疫球蛋白（HBIG）可與HBsAg形成復(fù)合物，阻礙其被檢出。

三、操作相關(guān)因素

規(guī)范的操作流程是獲得可靠結(jié)果的關(guān)鍵。

1、加樣問題：加樣量不足、加樣時間過長（尤其對弱陽性樣本）、或移液器不準(zhǔn)，都可能導(dǎo)致信號偏低。

2、溫育條件：溫育溫度（通常為37℃）和時間未嚴(yán)格控制，會影響抗原抗體結(jié)合效率。

3、洗板問題：洗板次數(shù)過多或力度過大，可能導(dǎo)致已結(jié)合的免疫復(fù)合物丟失。

4、顯色與判讀：顯色時間過短，低滴度樣本可能來不及顯色；未使用雙波長讀數(shù)可能增加背景干擾，導(dǎo)致弱陽性被誤判為陰性 。

四、內(nèi)源性干擾

類風(fēng)濕因子、補體等非特異性物質(zhì)結(jié)合抗體，導(dǎo)致假陽性或假陰性；

免疫抑制患者（如艾滋病）抗體生成不足。

五、其他原因

基因突變影響抗體結(jié)合位點；

檢測方法局限性（如ELISA靈敏度不足）?

建議

為避免ELISA假陰性，建議采取以下措施：

1、對于強陽性可疑樣本，進行梯度稀釋后再檢測，以排除鉤狀效應(yīng)。

2、優(yōu)先使用兩步法試劑盒，因其不易受鉤狀效應(yīng)影響。

3、嚴(yán)格按照說明書操作，確保試劑平衡、溫育時間和洗板程序標(biāo)準(zhǔn)化。

4、對于臨界或陰性但臨床高度懷疑的結(jié)果，應(yīng)結(jié)合其他檢測方法（如PCR）進行復(fù)核。

通過理解這些因素并采取相應(yīng)的預(yù)防措施，可以減少ELISA實驗中的假陰性結(jié)果。