怎樣減少PCR實驗中的氣溶膠污染?實用策略看這里
點擊次數:47 更新時間:2026-01-06
PCR實驗中氣溶膠主要產生于核酸提取、移液、離心、開蓋等操作,懸浮的DNA/RNA片段可擴散至整個實驗室,附著于表面或儀器,導致假陽性頻發、多區域交叉污染,甚至威脅實驗人員健康。減少PCR實驗中的氣溶膠污染,可以采取以下措施:
?操作規范
使用帶濾芯槍頭,每加一個樣本更換槍頭,移液器外壁用75%酒精擦拭。
避免劇烈搖動反應管或開蓋過快,減少氣溶膠生成。
預混試劑分裝保存,減少重復開蓋次數。
實驗室分區與通風
嚴格劃分?試劑準備區?、?樣本處理區?和?擴增區?,各區需物理隔離并配備獨立移液器。
使用負壓通風系統,控制空氣從低風險區向高風險區單向流動,避免氣溶膠擴散。
環境維護
定期通風:保持實驗室每天至少4小時的通風,特別是在使用空調時,以減少氣溶膠的積聚。
紫外定時照射:常規實驗結束后,設置紫外定時照射,每天照射2小時,并注意開窗通風以避免臭氧積累。
?污染清除技術
采用?dUTP-UNG酶系統?:在反應液中摻入dUTP,擴增后通過糖基化酶降解含dU的產物,防止殘留污染。
定期用稀酸(1mol/L HCl)或紫外燈(254nm,30分鐘)處理設備表面。
預防措施
陽性對照:每次實驗添加陰性對照和陽性對照,以便監測實驗室氣溶膠污染情況。
試劑分裝:將試劑分裝在小容量的離心管中,減少多次開蓋的機會。
生物安全柜:對于產生氣溶膠的操作,應在生物安全柜內進行,確保操作的封閉性。
通過上述綜合措施,可以有效減少PCR實驗中的氣溶膠污染,確保實驗結果的準確性和可靠性。
