ELISA（酶聯免疫吸附測定）是一種高靈敏度、高特異性的免疫檢測方法，廣泛應用于科研領域，用于定量檢測血清、血漿、組織液等生物樣本中的目標蛋白含量。小鼠ELISA試劑盒的使用步驟可分為以下關鍵環節，結合不同檢測原理（如雙抗體夾心法、競爭法等）的共性操作整理：

檢測流程

1、?加樣與孵育

?標準品孔?：加入梯度稀釋的標準品（如15μL/孔）。

?樣本孔?：加入待測樣本（15-100μL/孔，依試劑盒要求）。

?空白孔?：僅加樣本稀釋液作為對照。

貼封板膜后，37℃孵育60分鐘。

2、?洗滌步驟?

棄去孔內液體，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置20秒后甩干，重復洗滌5次。

3、酶標抗體反應?

每孔加入稀釋后的酶標抗體（如100μL），37℃孵育30分鐘，再次洗滌5次。

4、?顯色與終止

加入TMB底物（100μL/孔），避光孵育10-15分鐘。

加入終止液（50-100μL/孔）終止反應，溶液變黃。

實驗前準備

1、?試劑平衡?

將試劑盒組分（標準品、酶標抗體、底物等）及樣本置于室溫（20-25℃）平衡60分鐘，避免溫度差異影響反應效率。

2、?洗滌液配制?

濃縮洗滌液需用去離子水稀釋至工作濃度（如20倍稀釋），充分混勻后使用。

結果讀取

使用酶標儀在450nm波長測定各孔OD值，以標準品濃度繪制標準曲線，計算樣本濃度。

注意事項與建議

1、試劑使用前恢復至室溫，避免溫度差異影響反應。

2、實驗過程中避免直接接觸底物A/B液和終止液，佩戴手套和護目鏡。

3、不同廠家的試劑盒操作略有差異，務必按照所用試劑盒說明書執行。

4、若結果在標準曲線線性范圍外，應重新稀釋樣本后再測。

通過上述步驟，可以準確地使用小鼠ELISA試劑盒檢測特定蛋白質或抗原的含量，為科學研究提供重要數據支持。