運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

培養(yǎng)：
1.取出小鼠后瀝干酒精，放入超凈臺(tái)內(nèi)，固定在泡沫板上。
2.用鑷子提起皮膚，用解剖剪剪開(kāi)皮膚一個(gè)橫切口，將皮膚向上撕開(kāi)，然后剪開(kāi)肌肉等，暴露出腹腔，在左側(cè)找到脾臟，用彎頭眼科鑷取出脾臟，置于無(wú)菌培養(yǎng)皿中。
3.用生理鹽水將取出的脾臟清洗多次，并剔除多余無(wú)用的組織。
4.將篩網(wǎng)置于平皿中，脾臟置于篩網(wǎng)上，用彎頭鑷鑷住，輕輕在篩網(wǎng)上進(jìn)行碾磨，同時(shí)不停滴加不含血清的培養(yǎng)液沖洗。
5.將碾磨好的細(xì)胞懸液吸入至離心管中，離心(1000rpm,5min)，吸去上清（去除血液等）。
6.加入10ml培養(yǎng)液，吹打混勻，取樣計(jì)數(shù)。
7.將稀釋好的細(xì)胞懸液分裝于培養(yǎng)瓶中，輕輕搖晃混勻，在培養(yǎng)瓶上。
?
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長(zhǎng)至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) =計(jì)算貼壁率。 
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。
雞III型前膠原氨基端原肽(PIIINP)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

雞淀粉樣前體蛋白(APP)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

雞凝血酶原片段F1+2(F1+2)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

雞C-Myc結(jié)合蛋白(MYCBP)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

雞載脂蛋白H(ApoH)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒  

雞神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白4(NRG-4)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

雞血小板相關(guān)補(bǔ)體3(PAC3)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

雞尿苷二磷酸葡萄糖神經(jīng)酰胺葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶(UGCG)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

雞肝配蛋白A4 (EFNA4)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

雞法尼基二磷酸法尼基轉(zhuǎn)移酶1(FDFT1)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒  

雞雌激素受體β(ERβ)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

雞唾液酸乙酰酯酶(SIAE)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

雞囊性纖維化跨膜傳導(dǎo)調(diào)節(jié)因子(CFTR)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

雞微量轉(zhuǎn)鐵蛋白(MTF)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

293T(人胚腎細(xì)胞)規(guī)格Phospho-TAK1(Thr187)  磷酸化轉(zhuǎn)化生因子β活化激酶1 規(guī)格: 0.1mlCOLEC11  凝集蛋白家族11抗體 規(guī)格: 0.2ml

Nogo-A  軸索過(guò)度生抑制因子-A抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-FHIT (Tyr114)  磷酸化脆性組氨酸三聯(lián)體抗體 規(guī)格: 0.1ml

BRLF1  立即早期基因BRLF1抗體（鼻咽基因） 0.2mlPhospho-HP1 gamma (Ser93)  磷酸化染色質(zhì)相關(guān)蛋白1-γ抗體 規(guī)格: 0.1ml

TSARG4  生細(xì)胞凋亡相關(guān)基因4抗體 規(guī)格: 0.1mlDUX3  DUX3蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

MARCH8  膜相關(guān)環(huán)指蛋白8抗體 規(guī)格: 0.2mlPKA gamma  蛋白激酶Aγ抗體 規(guī)格: 0.2ml

MDGA2  神經(jīng)元膜糖蛋白錨定蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2mlKCNA5  鉀電壓閥門(mén)通道混合器相關(guān)亞家族成員5抗體 規(guī)格: 0.2ml

Goat Anti-Bovine IgG/PE  PE標(biāo)記的羊抗牛IgG 規(guī)格: 0.1mlCIDEB  促進(jìn)凋亡基因抗體 規(guī)格: 0.2ml

prox1  prox-1抗體 規(guī)格: 0.1mlRabbit Anti-Biotin/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗生物素抗體IgG 規(guī)格: 0.1ml

RFPL4A/RNF210  環(huán)指蛋白210抗體 規(guī)格: 0.2mlDAPK2  凋亡相關(guān)蛋白激酶2抗體 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-mTOR (Tyr144)  磷酸化雷帕霉素靶蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-ATF2(Ser472)  磷酸化活化復(fù)制因子2抗體 規(guī)格: 0.1ml

ERK1/MAPK3  絲裂原活化蛋白激酶3抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-MEF2A(Thr319)  磷酸化肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2抗體 規(guī)格: 0.1ml

SERPIN A11  絲氨酸蛋白酶抑制劑A11抗體 規(guī)格: 0.2mlGDF9  生分化因子9抗體 規(guī)格: 0.1ml

Rabbit Anti-horse IgG/FITC  FITC標(biāo)記的兔抗馬IgG 規(guī)格: 0.3mlphospho-AKT1(Thr34)  磷酸化蛋白激酶B抗體 規(guī)格: 0.1ml

CCL13/MCP-4  單核細(xì)胞趨化蛋白4抗體 規(guī)格: 0.2mlCBX1/HP1 β  異染色體同源蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

實(shí)驗(yàn)事項(xiàng)：
1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請(qǐng)立即按照說(shuō)明書(shū)要求保存試劑。  實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時(shí)，請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時(shí)，前一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過(guò)程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請(qǐng)確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測(cè)溶液A時(shí)，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液或檢測(cè)溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過(guò)強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請(qǐng)避光保存，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
    建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以稀釋倍數(shù)。