產品參數: 中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 產品貨號 | Cdc42抑制劑(ML141) | ML141 | 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg | BJ-01X7480 |
商品詳細介紹: ML141是Cdc42高效選擇性抑制劑,IC50值為200nM,對其他Rho GTPase家族成員作用力弱。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! :71203-35-5 別名:CID-2950007 純度:99.51% 分子量:407.49 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
實驗報告: 一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 培養操作步驟 : 1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布; 2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片); 3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時; 4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中; 5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
 實驗要點及說明: 1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法; 2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃,并經過鉻酸洗液處理; 3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕; 4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率; 5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。 操作要點: 1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。 2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。 3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。 4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。 5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。 6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。 European Brown Hare Syndrome Virus(EBHSV)歐洲棕色野兔綜合癥病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Connexin-31 間隙連接蛋白31抗體 規格: 0.1ml Ureaplasma spp.脲原體通用探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周phospho-c-Abl(Tyr272) 磷酸化非受體酪激c-Abl抗體 0.1ml Cryphonectria cubensis桉樹潰瘍病PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Goat Anti-human IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標記的羊抗人IgG 規格: 0.1ml Koi Herpesvirus(KHV)錦鯉皰疹病毒Sph基因PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用) 50次 低溫 負20度 一年 2-4周PCDHB7 原鈣粘蛋白β7抗體 規格: 0.2ml Streptococcus iniae海豚鏈球LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Dog IgM/PE-CY5 PE-CY5標記的兔抗犬IgM抗體 規格: 0.1ml Hyaloma spp.眼蜱通用探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Transcription factor 25/Nulp1 核轉錄因子25抗體 規格: 0.2ml Radix scutellariae黃芩染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周FAM76B FAM76B蛋白抗體 規格: 0.2ml Anaplasma phagocytophilum嗜吞噬 無漿體(無形體)LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周IL-12 白介素12抗體 規格: 0.1ml Schistosoma japonicum日本血吸蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周E2F6 轉錄因子E2F6抗體 規格: 0.1ml Radix codonopsis黨參探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周SSTR4 生抑素受體4抗體 規格: 0.1ml Cdc42抑制劑(ML141)angiotensin II和endothelin A受體雙重抑制劑(Sparsentan) LOXL2抑制劑(LOXL2-IN-1 hydrochloride) PPARα激動劑(GW7647) VEGFR2激酶抑制劑(SU5408) adenylate cyclase抑制劑(CB-7921220) Na+/H+交換抑制劑(Eniporide hydrochloride) HIF hydroxylase抑制劑(Desidustat) thrombin受體激動劑(Sfllrnpndkyepf) Lck抑制劑(RK-24466) KCa3.1激活劑(SKA-121) apelin受體激動劑([Pyr1]-Apelin-13)
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